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技術(shù)文章
選擇多通道熒光定量PCR儀應(yīng)避免的兩個(gè)誤區(qū)點(diǎn)擊次數(shù)：719 更新時(shí)間：2021-12-08
多通道熒光定量PCR儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，受到越來(lái)越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟的今天，也許對(duì)你來(lái)說(shuō)，難得不是實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的問(wèn)題，而是選擇哪一種熒光定量PCR儀，面對(duì)各種不同性能的產(chǎn)品，您又該如何選擇呢？
選擇PCR儀前，首先建議大家走出認(rèn)識(shí)熒光定量PCR的兩個(gè)誤區(qū)：
誤區(qū)一：儀器通道越多越好
隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用，多重?cái)U(kuò)增越來(lái)越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。從單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個(gè)廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀，眼花繚亂的選擇讓人無(wú)所適從，就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。
考慮多通道熒光定量PCR儀的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用、人人可用，因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。
誤區(qū)二：PCR儀無(wú)需梯度功能
對(duì)于使用染料法的定量PCR反應(yīng)，雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度（Tm值），但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會(huì)很大。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問(wèn)題——在反應(yīng)過(guò)程中每個(gè)孔的溫度控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出適合的反應(yīng)條件。
使用有梯度功能的熒光定量PCR可以一次完成以往多次實(shí)驗(yàn)才能完成的優(yōu)化過(guò)程，簡(jiǎn)化了摸索PCR反應(yīng)條件的繁瑣實(shí)驗(yàn)，既節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間提高效率，又節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
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